分光光度計和酶標儀都是實(shí)驗室常用的兩種儀器,它們的測定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,測定的都是樣本的吸光度。
酶標儀按照功能的不同劃分,可以分為
(1)光吸收酶標儀(可見(jiàn)酶標儀,紫外/可見(jiàn)酶標儀)
(2)熒光酶標儀
(3)化學(xué)發(fā)光酶標儀。
分光光度計按照波長(cháng)及應用領(lǐng)域的不同可以分為:
(1)可見(jiàn)光分光光度計
(2)紫外分光光度計
(3)紅外分光光度計
(4)熒光分光光度計
(5)原子吸收分光光度計。
分光光度計和酶標板存在一些不同之處,具體差別體現在以下三個(gè)方面:
(1)盛裝待測溶液的容器:分光光度計用的是比色皿,酶標儀使用的是塑料微孔板(酶標板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標板通常為48孔或96孔,每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:分光光度計是水平光路,而酶標儀則是垂直光路。由于酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線(xiàn)只能垂直穿過(guò),因此酶標儀的光束都是垂直通過(guò)待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液。垂直光的特點(diǎn)是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長(cháng)度:由于光密度(OD值)與吸光系數,待測組分的濃度以及光路長(cháng)度成正比關(guān)系。分光光度計采用的比色杯的寬度通常是25px,所以光路長(cháng)度固定為25px。因此不同儀器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。而酶標儀采用的是垂直光路,所以光路的長(cháng)度應該是液體液面的高度,所以測得的值受到樣品的體積的影響。